一、β-乳糖苷酶染色实验简介与原理
实验简介： β -半乳糖苷酶是一种是细胞溶酶体中的水解酶，能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。其结构基因为LacZ，与LacY（半乳糖苷透性酶）和LacA（半乳糖苷转乙酰酶）同组成乳糖操纵子，并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下，支配调节β-半乳糖苷酶的合成。β-半乳糖苷酶一般广泛存在于动植物界中。
实验原理：绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
二、β-乳糖苷酶染色临床意义
在临床上，β半乳糖苷酶，在肾近曲小管上皮细胞中含量较高。尿中β半乳糖苷酶活性可反映肾实质，特别是肾小管的早期损伤，与尿中N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶一同测定作尿酶谱分析，有助于病程观察和预后评价。如对各种肾病的鉴别诊断、药物对肾的毒性作用、感染、休克、肾移植排异反应、急性肾小管坏死等疾病的早期监测等。衰老相关β -半乳糖苷酶染（
senescenceassociatedb-galactosidase SA -b-Gal）：体外培养细胞在 p H 为 6 时 , 其β-半乳糖苷酶染色的阳性率随代龄增加而增加 , 这种中性β 2 半乳糖苷酶被定义为衰老相关的β-半乳糖苷酶 ( SA 2 β 2 gal) 。血清饥饿引发的生长抑制并不能提高 SA 2 β 2 gal 的活性 ,Werner 综合症患者皮肤成纤维细胞体外培养时增殖能力的丧失快于正常人 ,同时 ,SA 2 β 2 gal 阳性细胞的积累速度也加快。永生化细胞检测不到 SA 2 β 2gal 的活性 , 转基因技术诱导永生化细胞衰老的同时 ,也诱导衰老相关β 2 半乳糖苷酶的活性。而且 ,老年个体皮肤组织切片衰老相关β 2 半乳糖苷酶染色的阳性率高于年轻个体。基于以上观察 ,人们认为这种中性β 2 半乳糖苷酶是一种很好的可用于体内外衰老研究的生物学标志。
三、β-乳糖苷酶染色实验步骤（样本与实验目的不同步骤均有不同）
step1：固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干
Step2：如涂片需要消化，可加唾液或麦芽糖淀酶，置室温消化60min，然后用蒸馏水冲洗
Step3：10g/L高碘酸氧化15~20min,蒸馏水冲洗，待干
Step4：置雪夫染液中室温染色30~60min
Step5：用亚硫酸溶液冲洗3次后，再用自来水冲洗2~3min，待干
Step6：蒸馏水洗。
Step7：20g儿甲绿复染10~20min
Step8：水洗，待干，镜检拍照
四、β-乳糖苷酶染色常见问题分析及原因解析
1、染色过深或过浅
染色时间、分化时间过长或不够，染色过程可在镜下控制，适当调整时间。
2、切片染色不均
取材固定不当，取材规范标准，固定彻底；
脱水不够，重新脱水、透明、浸蜡。
3、 切片染色模糊不清
包埋蜡温度过高；
脱水透明不彻底。返回搜狐，查看更多
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