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细胞增殖及毒性检测
项目简介：
细胞毒性检测是生物相容性测试的一种，检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况，即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响，来评价药物或材料的毒性或者活性，主要用于药物活性筛选、细胞增殖/毒性测定、抗肿瘤药效计算IC50等；常用MTT法或者CCK8法检测，另外也可以通过Live/dead双染法进行细胞成像，更直观的记录细胞的存活情况。
在之前的推文中，实验菌已经详细总结了 CCK8的相关原理和方法，有需要的小伙伴们可以在公众号查询。 本期继续为大家带来CCK8的相关小知识，与以往不同，这次主要为大家带来一些实验操作上的误区和参考方向~
话不多说，直奔主题。如果没有特殊的需求，普遍认为CCK8是操作相对简单且数据更稳定的检测方法，毕竟从时间效率上看，CCK8无疑更胜一筹，只需一个小小试剂盒即开即用，但就是这个简单却又不简单过程也会也会对初学者造成一定困扰。因此， 以细胞毒性实验为例结合个人实验经验，为大家扫除CCK8道路上的“拦路虎”！
一般来说，CCK8的实验过程相对简单。简单总结可以分为 配置细胞悬液、加入待测物质、待测物质与细胞共同孵育一定时间、加入CCK物质、测定吸光度五步，那么从实验过程中不难发现我们需要注意的问题：
（1）配置细胞悬液。一般来说，实验是从这一步开始的，有一个好的开端才会有一个好的结果。如果是第一次做或者第一次种此类细胞，建议先做几个孔去摸索接种数量和培养时间； 细胞悬液一定要混合均匀，避免其沉淀导致每个孔的细胞数量不一样； 个人经验是在培育时间内不要让细胞长得太满，其一无法判断是否堆积生长会影响药物进入细胞进而影响OD值，其二生长不均匀会导致孔间OD值偏差较大，影响最终结果。
（2）加入CCK8溶液后孵育的时间。孵育时间与细胞类型和种植细胞的密度是正相关的，如果没有“传承经验”建议设定一系列梯度时间分别进行监测，选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续的实验。当然，太长的时间就不可取了，细胞在孔里几天不换液的话，结果不需要多说了吧~（ 这里指出一点小建议，考虑到孵育过程每孔蒸发量不一样，所以在加CCK8时，可以将旧的培养基吸出后在加入新鲜的培养混匀后在进行检测）
（3）OD值的检测。OD值不稳定可能是大家实验过程中遇到过的最多问题了，影响OD值的因素很多，比如细胞密度、孵育时间、检测时孔里可能有气泡等小细节都是需要大家进行摸索的~OD值过高可以适当减少细胞数量和缩短共同孵育时间；OD值过低则可以适当增加细胞量与延长加入CCK8试剂后的反应时间。（ 建议：将OD值控制在1.0左右附近比较好，酶标仪与UV的原理类似，都有一个最佳的检测范围超过了这个范围数据就会不稳定，因此为了避免读数不准确要根据自己的数据范围设定具体的实验细节）
细节决定成败，这句话在CCK8实验上得到了完美的呈现！小小实验简单却又不简单，需要大家精心打磨实验设计。以上就是为大家带来的一些CCK8 个人实验心得，仅供大家参考。欢迎大家留言指正共同进步 ~返回搜狐，查看更多
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