实时荧光定量PCR(qPCR)和传统的PCR在多个方面存在显著的不同，以下是两者的详细对比：

基本原理与操作

传统PCR：基本原理是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。PCR扩增包括三个基本步骤：变性、退火和延伸。通过反复进行变性-退火-延伸循环，DNA片段在数量上呈指数级增加，从而在短时间内获得大量的DNA片段。

实时荧光定量PCR：在传统PCR的基础上加入了荧光染料或探针，能够实时监测PCR反应过程中荧光信号的变化。这种方法可以在PCR扩增过程中，对每个循环的产物进行定量，并通过分析软件绘制扩增曲线，从而得到待测样品的初始模板浓度。

技术特点

灵敏度与特异性：

· 传统PCR：虽然具有较高的灵敏度，但难以避免非特异性扩增的干扰，且只能在扩增结束后进行产物检测，无法实时了解PCR反应过程中产物的变化。

· 实时荧光定量PCR：通过实时检测荧光信号的变化，可以在扩增过程中及时发现并排除非特异性扩增，提高了检测的特异性和准确性。同时，其检测范围也更广，可以覆盖更多的模板浓度范围。

操作简便性：

· 传统PCR：操作相对繁琐，需要多次开盖、加样等操作，且需要手动进行产物检测。

· 实时荧光定量PCR：可以实现全封闭操作，减少了污染的可能性，提高了操作的简便性。此外，荧光定量PCR仪通常具有自动化程度高、操作简便等特点，可以大大提高实验效率。

安全性：

· 传统PCR：需要使用有毒的溴化乙锭等染料进行产物检测，存在一定的安全隐患。

· 实时荧光定量PCR：在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析，避免了环境污染和假阳性结果的出现。

传统PCR：在基因组克隆、基因表达分析、基因突变检测等领域具有广泛的应用。然而，由于其无法实时了解PCR反应过程中产物的变化，因此在某些需要精确定量的领域存在一定的局限性。

实时荧光定量PCR：能够实时监测PCR反应过程中荧光信号的变化，从而更准确地了解PCR反应的动态过程。因此，在病原体检测、基因表达定量分析、疾病早期诊断等领域具有更广泛的应用前景。此外，它还被广泛应用于食品安全与环境监测、遗传病筛查、药物疗效评估等多个领域。

综上所述，实时荧光定量PCR相比传统PCR在灵敏度、特异性、操作简便性、安全性以及应用领域等方面均表现出显著的优势。这些优势使得实时荧光定量PCR在科研和临床工作中得到了广泛的应用和认可。

1.病理检测：石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。

2.分子生物学实验：荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。

3.细胞实验：耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。

4.动物实验：动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价等。

5.微生物学实验：抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。返回搜狐，查看更多

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