清洁验证在GMP中一直是很重要的内容，在官方检查时更是重点关注的领域，尤其是在多产品共线的生物制药企业中。生物制品因其独特性，在进行清洁验证时，相较于化药等其他药品，往往需要考虑一些额外的关注点。
本文将从法规以及行业指南出发，结合gempex德恩咨询专家的实战经验，与大家分享生物制品清洁验证中5大特殊关注点，希望可以帮助大家提升清洁验证效率。
生物制品清洁验证5大特殊关注点：
- 离线清洁的病毒污染控制
- 产品在清洁工艺中的降解研究
- 选取产品还是降解物做取样回收率研究
- 间接/无产品接触表面要不要做清洁验证
- 病毒、支原体污染控制
01 离线清洁的病毒污染控制
清洁工艺的设计开发是清洁验证生命周期中的第一步，一个优质的清洁工艺是清洁验证成功的基石。清洁验证的核心在于控制污染与交叉污染。在设计清洁工艺时，我们不仅要关注清洁工艺的清洁能，还需要警惕清洁操作本身可能带来的额外污染或者交叉污染风险，比如离线清洁操作。
我们的专家在执行项目时发现，可能由于厂房面积的限制，部分企业的上下游或者除病毒前后工序的工器具会共用同一个清洗间或者清洗设备。这种情况下我们需要关注除病毒后区使用的工器具被除病毒前区的工器具污染，从而把潜在的病毒带入产品的风险。比如收获工序结束后拆卸下来的一些接触料液的工器具可能携带病毒，转移过程中可能导致病毒扩散/污染。因此，建议先在原地进行病毒灭活（如泡碱），再在密封状态下转运。同时，清洗间的病毒污染控制措施也要到位，比如工器具的单向流结合清洗机/灭菌柜双扉设计，把灭活/灭菌前后的器具严格分开。
02 产品在清洁工艺中的降解研究
无论是EMA关于HBEL的指南，还是国内近期发布的清洁验证技术指南（征求意见稿），都提到生物制品在清洁工艺（极端pH 和/或加热）条件下往往会降解从而失去药理活性，此时基于毒理学的评估来设定产品残留限度可能是不适用的。基于这个假设，很多企业会参考PDA指南使用TOC的非专属方法以及采用上游5-10ppm、下游1-2ppm的默认限度值。
但是，我们的产品真的降解了吗？
活性成分的降解和失活情况需要在实验研究中证实。PDA指南推荐了一些做法，比如让产品经历清洁工艺的条件后，使用专属性方法进行检测看是否还有活性产品的存在。在研究过程中还需要关注经历清洁工艺后，溶液中的化学物质对检验方法是否存在干扰导致假阴性。这里分享PDA指南的三个推荐做法：
- 引入控制组，在控制组中把活性产品加入到中和后的清洁剂溶液（模拟清洁工艺结束后的状态），以模拟清洁工艺结束后剩余化学物的干扰；
- 通过超滤或者其他合适的方式把可能干扰检验方法的物质去除掉，再进行实验；
- 如果只有表面活性剂干扰会干扰检验方法，可以使用清洁剂中的碱来做降解实验，因为一般主要是碱起到水解作用。
如果研究数据表明活性成分未完全降解或失活，仍需要使用基于健康的暴露限值HBEL来计算活性成分的残留限度。相对于给降解物做动物实验计算HBEL，重新设计开发一个有效降解产品的清洁工艺可能更为简单和高效。
03 选取产品还是降解物做取样回收率研究
对于会被清洁工艺条件降解的蛋白产品，一般也考虑使用蛋白本身进行取样回收率测试。因为，一般而言蛋白降解物的分子量更小，其极性也更大，理论上水溶性也更好，使用蛋白做取样回收率检测可代表更差情况。但是，如果降解物有安全或者溶解性问题，降解物也应该作为目标残留进行取样回收率测试。
04 间接/无产品接触表面要不要做清洁验证
以下举例两个比较典型的例子。
· 冻干机
产品在冻干机内处于半敞口状态且靠近搁板，破空过程中可能有上一批产品残留随空气进入瓶子，因此通常也需要纳入清洁验证的范畴。考虑到非直接接触，PDA指南推荐用10ppm TOC 标准，或者引用冻干工序前后直接接触产品表面的残留限度标准。具体标准可以根据实际情况制定。
图1 冻干机*
· 隔离器
本文特指ADC产品中处理小分子所使用的隔离器
对于共线的高活性药物来说，考虑到残留物的高活性（严格的HBEL），在隔离器内可能因空气紊流通过空气转移到下一个产品，因此共用的隔离器都可能是清洁验证的一部份，或经评估后开展适当的检测。
图2 隔离器*
*以上图片均来源于网络
05 病毒、支原体污染控制
一般而言，病毒与支原体不是通过清洁工艺去除的，清洁验证对于病毒与支原体污染的控制并不是主导作用，而是作为生物污染控制策略的其中一个辅助环节。
病毒、支原体污染的主要控制在于细胞库的控制、除病毒过滤工艺验证、UPB的取样检测、原辅料的质量控制等方面。
在清洁工艺中，我们可以采取的措施包括：
- 使用氢氧化钠对潜在的病毒进行灭活，防止病毒后区工艺被污染；
- 使用浓氢氧化钠或者浓次氯酸钠降低TES风险。
以上为本期的全部内容。希望这5个关键的特殊关注点能够帮助您在清洁验证方面更上一层楼。如果您觉得有用，请将本文转发给更多的人~
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