草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.) Nakai为金粟兰科草珊瑚属植物，是传统中药肿节风的基原植物，全草入药，具有清热凉血、活血消斑、驱风通络的功效，用于血热发斑发疹、风湿痹痛、跌打损伤等[1]。草珊瑚在我国资源丰富，主要分布于贵州、江西、云南、广东、广西、四川、福建、浙江、海南和安徽等地[2]。现代药理研究表明草珊瑚具有良好的抗炎、抗疟、抗肿瘤、抗菌、抗氧化和神经保护等多重功效[3]。
贵州作为草珊瑚主要产地之一，民间较为广泛的应用草珊瑚。目前有关黔产草珊瑚化学成分分离纯化的研究尚不全面，黔产草珊瑚中化学成分结构类型及其物质活性有待进一步探索。鉴于此，本研究对黔产草珊瑚95% 乙醇提取物开展了分离纯化研究，分离鉴定出14 个化合物，分别为(7S,8S)- 7,8,5′,9′- 四羟基-3′- 甲基-3,4- 亚甲基二氧基-1′- 丙烷- 新 木脂素[(7S,8S)-7,8,5',9'-tetrahydroxy-3'-methoxy-3,4-methylenedioxy-1'-propane-neolignan ，1] 、臭矢菜素D （cleomiscosin D ，2）、蛇菰宁B （balanophonin B ，3）、松脂素（pinonesinol ，4）、异美五针松二氢黄酮（pinostrobin ，5）、7,4'- 二甲氧基二氢黄酮（7,4'- dimethylnaringenin ，6）、2',6'- 二羟基-4'- 甲氧基二氢 查耳酮（2',6'-dihydroxy-4'-methoxydihydrochalcone，7）、3-[2-(4- 羟基-3- 甲氧苯基)-3-( 羟甲基)-7- 甲氧基- 2,3- 二氢-1- 苯并呋喃-5- 基] 丙基（3-[2-(4-hydroxy-3- methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2,3-dihydro-1-benzofuran-5-yl]propyl ，8）、异嗪皮啶（isofraxidin ，9）、圣草酚（eriodictyol ，10）、香豌豆酚（orobol ，11）、花柏色酮（sawarachromone ，12）、6 ,7 -二甲氧基香豆素（6,7-dimethoxycoumarin ，13）、rel-(3R,3'S,4R,4'S)-3,3',4,4'- 四氢-6,6'- 二甲氧基(3,3'-bi-2H- 苯并吡喃)-4,4'- 二醇 [rel-(3R,3'S,4R,4'S)- 3,3',4,4'-tetrahyd ro-6,6'-dimethoxy(3,3'-bi-2H-benzo- pyran)-4,4'-diol-4,4'-diol ，14] 。其中化合物1为新化 合物，化合物2、3、8、10～12及14为首次从草珊瑚中分离得到。并采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS ）刺激的BV-2 细胞模型评估14 个单体化合物的抗神经炎活性，以期为黔产草珊瑚的进一步开发和利用提供数据。
1 材料
1.1 材料
柱色谱正相色谱硅胶（60～80、200～300、300～400目）、薄层色谱正相硅胶板，青岛海洋化工有限公司产品；凝胶Sephadex LH-20为瑞典Amersham Biosciences公司生产。
1.2 仪器与试剂
Bruker Avance NEO 600 MHz超导核磁共振仪（德国Bruker 公司）；QE Focus 型串联四极杆飞行时间液质谱联用仪（赛默飞世尔科技有限公司）；Agilent 1200 高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Hei-VAP Digital G3 型旋转蒸发仪（德国Heidolph 公司）；DLSB-5/20 低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸有限公司）；安捷伦ZORBAXSB-C18 半制备柱色谱柱（250 mm ×9.4 mm ，5 μm ，美国安捷伦科技有限公司）；ME204E/02 型电子分析天平（瑞士梅特勒- 托利多公司）；色谱甲醇、氘代甲醇[ 萨恩化学技术（上海）有限公司] ；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。
2 方法
2.1 提取与分离
将晒干的黔产草珊瑚样品（85 kg ）粉碎成粗粉，用体积分数95% 乙醇加热回流提取3 次，每次2 h ，减压浓缩至无醇味，得到总浸膏。将总浸膏分散于水中，依次用石油醚（分析纯）、醋酸乙酯（分析纯）萃取，分别得到石油醚部位（1.9 kg ）、醋酸乙酯部位（3.3 kg ）。石油醚部位（1.9 kg ）经硅胶柱色谱分离，石油醚- 醋酸乙酯梯度洗脱，TLC 合并后得到12 个组分Fr. A1 ～A12 ，其中Fr. A4 、A7 、A9 组分均有不溶物析出，分别洗涤不溶物后得到化合物5（111.5 mg ）、6（88.0 mg ）、7（93.5 mg ）。
醋酸乙酯部位（3.3 kg ）经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷- 甲醇梯度洗脱，TLC 合并后得到19 个组分（Fr. B1 ～B19 ）。其中Fr. B6 （102.5 g ）组分通过C18 反相柱色谱以40% ～100% 甲醇梯度洗脱，TLC 合并后得到13 个组分Fr. B6-1 ～B6-13 ，其中Fr. B6-4 、B6-8 组分分别经结晶后得到化合物9（108.3 mg ）和2（23.5 mg ）。组分Fr. B6-9 （7.3 g ）经正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷- 甲醇（50 ∶1→1 ∶1 ）梯度洗脱得10 个组分Fr. B6-9-1 ～B6-9-10 。组分B6-9-6 （305.5 mg ）先后经半制备型高效液相（甲醇- 水60 ∶40 ，2 mL/min ）、HPLC 纯化（甲醇- 水55 ∶45 ，2 mL/min ）得到化合物1（2.0 mg ）、3（21.0 mg ）、4（23.5 mg ）和8（6.5 mg ）组分B6-9-7 经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（二氯甲烷- 甲醇1 ∶1 ）和HPLC 色谱（甲醇- 水60 ∶40 ，2 mL/min ）分离得到化合物10（17.0 mg ）和11（20.0 mg ）。组分Fr. B6-8 （7.3 g ）经正相硅胶柱色谱以石油醚- 醋酸乙酯（10 ∶1→1 ∶1 ）梯度洗脱得11 个组分Fr. B6-8-1 ～B6-8-11 。组分B6-8-7 （1.9 g ）经Sephadex L H-20凝胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶1）和重结晶后得到化合物12（16.9 mg）和13（7.7 mg）。组分B6-8-5（164.2 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶1）和HPLC色谱（甲醇-水43∶57，2 mL/min）分离得到化合物14（5.7 mg）。
2.2 抗神经炎活性
本实验采用LPS 诱导的小鼠小胶质细胞（BV-2 细胞）炎症模型，采用Griess 法测定分离得到的14 个化合物对LPS 诱导下BV-2 细胞产生NO 的抑制活性。用DMEM 高糖培养基[ 含10% 胎牛血清（FBS ）、青霉素链霉素双抗] 培养BV-2 细胞，并将细胞置于37 ℃、5% CO2 细胞培养箱中进行传代培养。取对数生长期状态良好的BV-2 细胞，制备细 胞混悬液，血球计数板计数，稀释至2.5×104个/mL，以90 mL/ 孔将细胞混悬液接种于96 孔板上，于37 ℃、5% CO2 培养箱培养24 h 。在96 孔板中设置空白对照组、模型组和加药组，每组均设3 个复孔，其中空白对照组和模型组各只设1 组，其他均为给药组。
2.2.1细胞毒性评价化合物用培养基稀释至500 μmol/L ，以10 mL/ 孔加药。于37 ℃、5% CO2 环境下孵育2 h 后，模型组和加药组每孔均加入10 mL LPS （10 μg/mL ）。细胞培养24 h 后每孔加入10 μL MTT 染色剂，继续培养4 h ，吸去上清液，加入150 μL DMSO ，测定吸光度（A ）值，计算细胞存活率。
2.2.2抗神经炎活性评价化合物用培养基稀释至200 μmol/L ，以10 mL/ 孔加药。于37 ℃、5% CO2 环境下孵育2 h 后，模型组和加药组每孔均加入10 mL 质量浓度为10 μg/mL 的LPS 。继续在37 ℃、5% CO2 培养箱中培养24 h 后，吸取每孔各50 μL 的上清液，按照NO 试剂盒说明书操作步骤，用酶标仪在540 nm 下检测各孔A 值，计算化合物对NO 生成的抑制率。实验重复3 次，计算平均值。再选取NO 抑制率大于60% 的化合物，用培养基稀释成6 个不同浓度的样品，重复上述步骤，测得A 值，每次实验均设吲哚美辛阳性对照，以浓度为横坐标，NO 抑制率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法（Reed and Muench 法）计算化合物的IC50 值，实验共重复3 次，结果取平均值。
3 结果与分析
3.1 化合物鉴定
化合物1：无色油状物，易溶于甲醇，[α]25 D−50.7° (c 0.048, MeOH) ，(nm):285.1 (3.41) 。高分辨质谱HR-ESI-MS 显示分子离子峰m/z 393.169 8 [M ＋H]+ （计算值C20H25O8 ，393.154 4 ），结合该化合物氢谱和碳谱确定其分子式为C20H24O8 ，有9 个不饱和度。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) 谱（表1 ）显示有1 个明显的甲氧基信号δH 3.88 (3H, s) ，1 个亚甲二氧基质子信号δH 5.94 (2H, s) 和5 个芳香氢信号δH 6.89 (1H, d, J = 1.8 Hz), 6.87 (1H, dd, J = 8.0, 1.8 Hz), 6.76 (1H, d, J = 7.8 Hz), 6.66 (1H, d, J = 3.3 Hz)。此外，13 C-NMR数据（表1）以及HSQC数据显示化合物1中共有20个碳信号，包括1个甲氧基δC 56.2和5个亚甲基，其中包括3个含氧亚甲基δC 62.5, 64.4, 101.2；7个次甲基分别为2个含氧次甲基δC 54.2, 87.7 以及5个sp2杂化次甲基碳信号δC 106.6, 108.3, 112.6, 116.2, 119.8；以及7个sp2季碳 ，分别为5个连氧季碳δC127.5, 144.3, 146.7, 147.6, 148.1 和2个不连氧季碳信号δC135.6, 135.6。结合以上数据可以确认该化合物为1,3,4-三取代苯环和四取代苯环的木脂素类化合物。进一步分析其二维核磁谱图发现化合物1与已知化合物(7S,8S)- 1-(4-hydroxy-3 -methoxyphenyl)-2-O-(6-hydroxy-2- methoxy-4-om-ega-hydroxy-propylphenyl)propane-1,3-diol 相似[4] ，主要差异为化合物1的C-3和C-4由亚二氧基取代，而已知化合物中的C-3和C-4分别由甲氧基和羟基取代。结合其HR-ESIMS发现化合物1比已知化合物多1个不饱和度，进一步结合HMBC谱图（图1）中H-10与C-3 (δC148.1) 和C-4 (δC146.7) 相关，可推测C-3和C-4位为亚甲二氧基取代的含氧五元环。再根据1 H-1H COSY谱（图1）中H-5/H-6、H-7/H-8/H-9、H-7'/H-8'/H-9'的相关信号，确定化合物1的平面结构。
此外根 据H-7和H-8的偶合常数为6.0 Hz（＞5.0 Hz），以及比旋光度确定化合物1的绝对构型为7S, 8S[5-7]，化合物鉴定为(7S,8S)-1-(3,4-methylenedioxy)-2-O-(6-hydroxy-2-methoxy-4-omegahydroxy-propyl-phenyl)propane-1,3-diol ，经Scifinder 数据库检索为新化合物，命名为草珊瑚素A 。
化合物2：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 415.1 [M －H]− ，分子式为C21H20O9 。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.92 (1H, d, J = 9.3 Hz, H-4), 6.87 (1H, s, H-5), 6.75 (2H, s, H-2′, 6′), 6.32 (1H, d, J= 9.6 Hz, H-3), 5.11 (1H, t, J = 5.4 Hz, H-8′), 4.96 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-7′), 4.36 (1H, m, H-9′a), 3.78 (3H, s, 6-OCH3), 3.76 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.67 (1H, m, H-9′b) ；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 160.2 (C-2), 148.2 (C-3′, 5′), 145.5 (C-6), 145.0 (C-4), 138.2 (C-9), 137.2 (C-7), 136.4 (C-4′), 131.9 (C-8), 125.9 (C-1'), 113.4 (C-3), 111.5 (C-10), 105.8 (C-2′, 6′), 100.9 (C-5), 78.0 (C-8′), 76.8 (C-7′), 60.1 (C-9′), 56.3 (3′, 5′-OCH3), 56.0 (6-OCH3) 。以上数据与文献报道基本一致[8] ，故鉴定该化合物为臭矢菜素D 。
化合物3：无定型粉末，ESI-MS m/z: 371.1 [M－H]− ，分子式为C20H20O7 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.96 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-3′), 6.94 (1H, d, J= 1.8 Hz, H-3), 6.92 (1H, dd, J = 7.8, 1.8 Hz, H-5′), 6.85 (1H, dd, J = 8.1, 2.1 Hz, H-5), 6.82 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6′), 6.79 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6), 5.39 (1H, d, J = 4.2 Hz, H-7′), 5.23 (1H, d, J = 4.2 Hz, H-7), 4.28 (1H, m, H-9′), 4.02 (1H, m, H-9′), 3.87 (3H, s, 2′-OCH3), 3.86 (3H, s, 2- OCH3), 3.66 (1H, m, H-8′), 3.35 (1H, d, J = 4.8 Hz, H-8) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 179.7 (C-9), 149.4 (C-2′), 149.2 (C-2), 148.2 (C-1′), 147.4 (C-1), 133.2 (C-4′), 132.4 (C-4), 119.8 (C-5′), 119.5 (C-5), 116.4 (C-6′), 116.1 (C-6), 110.6 (C-3′), 110.5 (C-3), 87.2 (C-7′), 85.1 (C-7), 73.8 (C-9′), 56.5 (C-8′), 56.4 (2′-OCH3), 54.4 (2-OCH3), 51.0 (C-8) 。以上数据与文献报道基本一致[9] ，故鉴定该化合物为蛇菰宁B 。
化合物4：无定型粉末，ESI-MS m/z: 357.1 [M－H]− ，分子式为C20H22O6 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.95 (2H, d, J = 1.8 Hz, H-2, 2′), 6.79 (4H, m, H-5, 6, 5′, 6′), 4.71 (2H, d, J = 4.2 Hz, H-7, 7′), 4.23 (2H, m, H-9a, 9′a), 3.86 (8H, s, 3, 3′-OCH3, H-9b, 9′b), 3.84 (2H, dd, J = 9.0, 3.6 Hz, H-9b, 9′b), 3.14 (2H, m, H-8, 8′) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 149.1 (C-3, 3′), 147.3 (C-4, 4′), 133.8 (C-1, 1′), 120.1 (C-6, 6′), 116.1 (C-5, 5′), 110.9 (C-2, 2′), 87.5 (C-7, 7′), 72.6 (C-9, 9′), 56.4 (C-8, 8′), 55.4 (3, 3′-OCH3) 。以上数据与文献报道基本一致[10] ，故鉴定该化合物为松脂素。
化合物5：黄色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 269.1 [M －H]− ，分子式为C16H14O4 。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.43 (5H, m, H-2′ ～6′), 6.07 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-8), 6.05 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-6), 5.40 (1H, dd, J = 12.0, 3.0 Hz, H-2), 3.79 (3H, s, 7-OCH3), 3.06 (1H, dd, J = 16.5, 12.0 Hz, H-3), 2.80 (1H, dd, J= 16.5, 3.0 Hz, H-3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 195.8 (C-4), 168.0 (C-7), 164.2 (C-5), 162.8 (C-9), 138.4 (C-1′), 128.9 (C-2′, 6′), 126.2 (C-4′), 126.2 (C-3′, 5′), 103.2 (C-10), 95.2 (C-6), 94.3 (C-8), 79.2, (C-2), 55.7 (7-OCH3), 43.4 (C-3) 。以上数据与文献报道基本一致[11] ，故鉴定该化合物为异美五针松二氢黄酮。
化合物6：黄色粉末，ESI-MS m/z: 299.1 [M －H]− ，分子式为C17H16O5 。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 12.04 (1H, s, 5-OH), 7.38 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.95 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.07 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-8), 6.04 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-6), 5.36 (1H, dd, J = 13.2, 3.0 Hz, H-2), 3.83 (3H, s, 7-OCH3), 3.80 (3H, s, 4′-OCH3), 3.09 (1H, dd, J = 18.0, 13.2 Hz, H-3a), 2.79 (1H, dd, J = 17.4, 3.0 Hz, H-3b) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 196.2 (C-4), 168.1 (C-7), 164.2(C-5), 163.0 (C-9), 160.2 (C-4′), 130.5 (C-1′), 127.9 (C-2′), 114.3 (C-3′), 103.2 (C-10), 95.2 (C-6), 94.3 (C-8), 79.1, (C-2), 55.8 (7-OCH3), 55.5 (4′-OCH3), 43.3 (C-3) 。以上数据与文献报道基本一致[12] ，故鉴定该化合物为7,4'- 二甲氧基二氢黄酮。
化合物7：淡黄色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 271.1 [M －H]− ，分子式为C16H16O4 。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.23 (5H, m, H-2 ～5), 5.97 (1H, s, H-3′), 3.74 (3H, s, 4′-OCH3), 3.32 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-α), 2.90 (2H, t, J = 7.8 Hz, H-β) ；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 204.5 (C-β′), 165.5 (C-2′, 4′, 6′), 141.6 (C-1), 128.4 (C-3, 5), 128.4 (C-2, 6), 125.9 (C-4), 104.6 (C-1′), 93.3 (C-3′, 5′), 55.4 (4′-OCH3), 45.3 (C-α), 30.1 (C-β) 。以上数据与文献报道基本一致[13] ，故鉴定该化合物为2',6'- 二羟基-4'- 甲氧基二氢查耳酮。
化合物8：无色油状液体，ESI-MS m/z: 401.2 [M－H]− ，分子式为C22H26O7 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.95 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2′), 6.82 (1H, dd,J = 8.1, 1.8 Hz, H-6′), 6.76 (1H, d, J= 8.1 Hz, H-5′), 6.72 (2H, s, H-4, 6), 5.50 (1H, d, J = 6.3 Hz, H-2), 4.07 (2H, m, H-10), 3.85 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (1H, dd, J = 12.9, 6.0 Hz, H-13), 3.81 (3H, s, 3′-OCH3), 2.65 (1H, t, J = 8.1 Hz, H-8), 2.03 (3H, s, H-12), 1.92 (2H, m, H-9) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 173.1 (C-11), 149.1 (C-3′), 147.7 (C-4′), 147.5 (C-7a), 145.3 (C-7), 136.1 (C-5), 134.7 (C-1′), 130.0 (C-3a), 119.7 (C-6′), 117.9 (C-4), 116.1 (C-5′), 114.0 (C-6), 110.5 (C-2′), 89.0 (C-2), 65.0 (C-13), 65.0 (C-10), 56.7 (3′-OCH3), 56.3 (7-OCH3), 55.4 (C-3), 32.9 (C-8), 31.8 (C-9), 20.8 (C-12) 。以上数据与文献报道基本一致[14] ，故鉴定该化合物为3- [2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2,3-dihydro-1-benzofuran-5-yl]propyl 。
化合物9：白色针状结晶（甲醇），ESI-MS m/z: 221.1 [M －H]− ，分子式为C11H10O5 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.79 (1H, d, J =9.4 Hz, H-4), 6.84 (1H, s, H-5), 6.19 (1H, d, J = 9.4 Hz, H-3), 3.93 (3H, s, 6-OCH3), 3.88 (3H, s, 8-OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 163.2 (C-2), 147.2 (C-6), 146.3 (C-4), 145.4 (C-9), 144.4 (C-7), 135.9 (C-8), 112.6 (C-3), 112.0 (C-10), 104.8 (C-5), 61.5 (8-OCH3), 56.7 (6-OCH3) 。以上数据与文献报道基本一致[15] ，故鉴定该化合物为异嗪皮啶。
化合物10：黄色无定 型固体， ESI-MS m/z: 287.1 [M －H]− ，分子式为C15H12O6 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.92 (1H, brs, H-2′), 6.79 (2H, m, H-5′, 6′), 5.90 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 5.88 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-6), 5.28 (1H, dd, J = 12.6, 3.0 Hz, H-2), 3.07 (1H, dd, J = 17.1, 12.9 Hz, H-3), 2.69 (1H, dd, J = 17.1, 3.0 Hz, H-3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 197.8 (C-4), 168.4 (C-7), 164.8 (C-5), 164.8 (C-9), 146.9 (C-4′), 1 46.5 (C-3′), 131.8 (C-1′), 119.2 (C-6′), 116.2 (C-5′), 114.7 (C-2′), 103.3 (C-10), 97.0 (C-6), 96.2 (C-8), 80.5 (C-2), 44.1 (C-3)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定该化合物为圣草酚。
化合物11：浅褐色粉末，ESI-MS m/z: 285.1 [M－H]− ，分子式为C15H10O6 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 8.02 (1H, s, H-2), 7.02 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2′), 6.84 (1H, dd, J = 8.4, 1.8 Hz, H-6′), 6.82 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5′), 6.32 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 6.20 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 182.2 (C-4), 166.2 (C-5), 163.8 (C-7), 159.7 (C-9), 154.8 (C-2), 146.8 (C-4′), 146.2 (C-3′), 124.8 (C-3), 123.8 (C-1′), 121.7 (C-6′), 117.4 (C-2′), 116.3 (C-5′), 106.2 (C-10), 100.2 (C-6), 94.8 (C-8) 。以上数据与文献报道基本一致[17] ，故鉴定该化合物为香豌豆酚。
化合物12：细小针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 305.1 [M －H]− ，分子式为C15H14O7 。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.64 (1H, s, 5-OH), 6.45 (1H, s, H-3), 6.31 (1H, d, J= 2.1 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 4.34 (1H, dd, J = 8.4, 6.3 Hz, H-3′), 3.60 (3H, s, COOCH3), 3.07 (1H, dd, J = 17.1, 8.4 Hz, H-2′a), 2.87 (1H, dd, J = 17.1, 6.3 Hz, H-2′b), 2.25 (3H, s, H-5′) ；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 202.7 (C-4′), 181.6 (C-4), 171.2 (C-1′), 164.9 (C-2), 164.4 (C-7), 161.5 (C-5), 157.7 (C-9), 109.7 (C-3), 103.8 (C-10), 99.1 (C-6), 94.0 (C-8), 52.8 (C-3′), 51.8 (COOCH3), 32.2 (C-2′), 28.7 (C-5′) 。以上数据与文献报道基本一致[18] ，故鉴定该化合物为花柏色酮。
化合物13：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 205.0 [M －H]− ，分子式为C11H10O4 。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.62 (1H, d, J = 9.6 Hz, H-4), 6.85 (1H, s, H-5), 6.84 (1H, s, H-8), 6.29 (1H, d, J = 9.6 Hz, H-3), 3.95 (3H, s, 7-OCH3), 3.92 (3H, s, 6-OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 161.6 (C-2), 153.0 (C-7), 150.1 (C-9), 146.5 (C-6), 143.5 (C-4), 113.7 (C-10), 111.6 (C-3), 108.0 (C-5), 100.1 (C-8), 56.5 (6-OCH3), 56.5 (7-OCH3) 。以上数据与文献报道基本一致[19] ，故鉴定该化合物为6,7- 二甲氧基香豆素。
化合物14：无色油状液体，ESI-MS m/z: 357.1 [M －H]− ，分子式为C20H22O6 。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 6.90 (2H, d, J = 1.8 Hz, H-2, 2′), 6.88 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-5, 5′), 6.82 (2H, dd, J = 8.4, 1.8 Hz, H-4, 4′), 4.74 (2H, d, J = 1.8 Hz, H-7, 7′), 4.24 (2H, dd, J = 9.6, 6.9 Hz, H-9a, 9a′), 3.88 (2H, dd, J = 9.3, 3.6 Hz, H-9b, 9b′), 3.10 (2H, m, H-8, 8′) ；13C-NMR (150 MH z, CDCl3) δ: 146.8 (C-3, 3′), 145.4 (C-6, 6′), 133.0 (C-1, 1′), 119.1 (C-4, 4′), 114.4 (C-5, 5′), 108.7 (C-2, 2′), 86.0 (C-7, 7′), 71.8 (C-9, 9′), 56.1 (3, 3′-OCH3), 54.3 (C-8, 8′)。以上数据与文献报道基本一致[20]，故鉴定该化合物为rel-(3R,3'S,4R,4'S)-3,3',4,4'- tetrahydro-6,6'-dimethoxy(3,3'-bi-2H-benzopyran)-4,4'-diol 。
3.2 抗神经炎活性实验结果
采用LPS 刺激的BV-2 细胞模型评估此次分离得到14 个单体化合物的抗神经炎活性，并采用MTT 法进行了细胞毒性实验。与空白对照组相比，14 个化合物在浓度50 μmol/L 时细胞存活率均大于80% 。实验结果表明，在给药浓度为20 μmol/L 时，化合物1、3、5、6、8、10和11均对诱导小鼠小胶质细胞（BV-2 细胞）中NO 的产生有不同程度的抑制作用。对其中抑制率大于60% 的化合物计算半数抑制浓度（median inhibition concentration ，IC50 ），化合物1、3、8对NO 的产生有很强的抑制作用，IC50 值分别为2.71、3.11、8.80 μmol/L [阳性对照吲哚美辛IC50＝（36.43±3.54 ）μmol/L] ；化合物6、10和11表现出中等抑制活性，IC50 值分别为35.80 、12.93 、17.23 μmol/L 。结果见表2 、3 。
4 讨论
神经炎症是由中枢神经系统发起的一种免疫反应，旨在保护大脑免受损伤，在神经退行性疾病的发生和发展中起着重要作用。BV-2 细胞是中枢神经系统中固有的免疫细胞，可以保护处于静息状态的神经元[21-22] 。当中枢神经系统受损时会释放出大量促 炎介质，使小胶质细胞活化释放出更多的促炎因子，进一步加重炎症反应，导致神经损伤[23]。因此，抑制神经胶质细胞过度活化引起的炎症反应对神经退行性疾病的治疗具有重要意义。
本研究从黔产草珊瑚全草的95% 乙醇提取物中分离鉴定得到了14 个化合物，包括4 个木脂素类化合物、2 个香豆素类化合物、6 个黄酮类化合物以及2 个其他类化合物，并且对所有的化合物进行LPS 诱导BV-2 炎症模型NO 的产生的抑制活性评价。结果显示，化合物1、3、5、6、8、10和11均表现出良好的抗神经炎活性，其中化合物1、3、8具有优异的抗神经炎活性（IC50 值均小于10 μmol/L ，远优于阳性药吲哚美辛）。本课题对黔产草珊瑚的化学成分及其抗神经炎活性的研究丰富了黔产草珊瑚的化学成分，为黔产草珊瑚抗神经炎活性成分的发现和进一步开发利用提供了研究依据。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
参考文献（略）返回搜狐，查看更多
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