柽柳科（Tamaricaceae ）水柏枝属植物小花水柏枝Myricaria wardii Marquand. 为分布于西藏地区的特有品种，也是传统藏药水柏枝的主要基原之一。藏药水柏枝又名“温布”“翁布”，记载于《晶珠本草 》《四部医典》等传统藏药典籍中，具有清热解毒、发散透疹、干黄水的功效，临床应用于温病时疫、咽喉肿痛、血热病和急慢性关节炎等多种炎症疾病[1-3]。据文献报道，水柏枝属植物在抗炎镇痛、抗氧化、保肝、抗菌、抗艾滋病（human immunodeficiency virus ，HIV ）等方面具有明显的生物活性[4-7] 。课题组前期研究发现，抑制补体过度激活是中草药发挥清热药效的重要途径之一[8] 。前期实验结果显示，具鳞水柏枝M. squamosa Desv. 、小花水柏枝、秀丽水柏枝M. elegans Royle. 和泽当水柏枝M. elegans var. tsetangensis P. Y. Zhang & Y. J. Zhang. 4 个藏药水柏枝基原的醇提物均显示良好的 抗补体活性，其半数抑制溶血浓度（half inhibit hemolysis concentration，CH50）为8.468～9.776 μg/mL。
为明确水柏枝的清热药效物质，本研究对小花水柏枝进行了抗补体活性成分研究，从其95 % 乙醇提取物中分离得到41 个化合物，分别鉴定为myricarian A （1）、3- 羟基-4,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯（methyl 3-hydroxy-4,5-dimethoxybenzoate，2）、3- 羟基-4- 甲氧基苯甲酸甲酯（methyl 3-hydroxy-4-methoxybenzoate ，3）、香草醛（vanillin ，4）、罗布麻宁（apocynin ，5）、丁香酸甲酯（methyl syringate ，6）、松柏醛（coniferaldehyde ，7）、3,4- 二羟基-5- 甲氧基苯甲酸甲酯（methyl 3,4-dihydroxy-5-methoxybenzoate ，8）、异阿魏酸甲酯（methyl isoferulate ，9）、对羟基苯甲醛（p-hydroxybenzal- dehyde ，10）、对羟基苯乙酮（p-hydroxyaceto- phenone ，11）、黑麦草内酯（loliolide ，12）、( ＋)- 去氢催吐萝芙木醇[(+)-dehydrovomifoliol ，13] 、没食子酸（gallic acid ，14）、原儿茶酸（protocatechuic acid ，15）、3-O- 甲基没食子酸（3-O-methylgallic acid ，16）、没食子酸乙酯（ethyl gallate ，17）、吐叶醇（vomifoliol ，18）、3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one （19）、咖啡酸（caffeic acid ，20）、蚱蜢酮（grasshopper ketone ，21）、花旗松素（taxifolin ，22）、3- 羟基-4,5- 二甲氧基苯甲酸（3-hydroxy-4,5-dimethoxybenzoic acid ，23）、对香豆素（p-coumaric acid ，24）、丁香酸（syringic acid ，25）、异落叶松脂素（isolariciresinol ，26）、burselignan （27）、(1',1',2',2'-tetramethylpropyl)-1,2-benzenediol （28）、二氢山柰酚（dihydrokaempferol ，29）、槲皮素（quercetin ，30）、N- 反式- 阿魏酰酪胺（N-trans-feruloyltyramine ，31）、terrestiamide （32）、(R)-3-(4- hydroxy-3-methoxy- phenyl)-N-[2-(4hydroxyphenyl)-2-methoxyethyl] acryl-amide （33）、(Z)-8,11,12-trihydroxy-9-octadecanoic acid （34）、9,12,13-trihydroxy-10,15-octadecadienoic acid （35）、水柏枝素A （myricaria A ，36）、异阿魏酸（isoferulic acid ，37）、原儿茶醛（protocate- chualdehyde ，38）、N- 反式- 阿魏酰-3- 甲氧基酪胺（N-trans-feruloyl-3-methyldopamine ，39）、山柰酚 （kaempferol，40）、香草酸甲酯（methyl vanillate，41）。其中，化合物1为新化合物，命名为水柏枝脂素A；5个倍半萜类成分（12、13、18、19、21）为首次从该属植物中分离得到；共26 个化合物表现出抗补体活性，CH50 为（0.20 ±0.03 ）～（4.72 ±0.01 ）mmol/L 。
1 仪器与材料
2 提取与分离
将干燥的小花水柏枝（6 kg ）粉碎，用95% 乙醇（15 L/ 次）反复渗漉提取至颜色接近无色，减压浓缩，得浸膏1.3 kg 。将浸膏混悬于3 L 蒸馏水中，依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇（1 L/ 次）萃取至萃取层色浅，分别得到石油醚部位（143 g ）、醋酸乙酯部位（104 g ）和正丁醇部位（306 g ）。
醋酸乙酯部位（取98 g ）采用正相硅胶色谱，以二氯甲烷- 甲醇- 水（1 ∶0 ∶0 ～0 ∶1 ∶1 ）为流动相梯度洗脱，得到组分Fr. 1 ～5 。Fr. 2 采用硅胶柱色谱，以二氯甲烷- 醋酸乙酯（0 ∶1 ～1 ∶2 ）梯度洗脱得到组分Fr. 2.1 ～2.3 。
Fr. 2.1 用硅胶色谱，石油醚- 醋酸乙酯（15 ∶1 ～0 ∶1 ）洗脱得到组分Fr. 2.1.1 ～2.1.4 。Fr. 2.1.2 经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷- 石油醚（100 ∶1 ）、二氯甲烷、二氯甲烷- 醋酸乙酯（100 ∶1 ～30 ∶1 ）洗脱，并经凝胶[ 二氯甲烷- 甲醇（1 ∶1 ）] 和硅胶柱色谱[ 二氯甲烷- 石油醚（2 ∶1 ～0 ∶1 ）- 二氯甲烷- 醋酸乙酯（100 ∶1 ）] 洗脱得到化合物2（10.0 mg ）和3（3.0 mg ）。Fr. 2.1.3 (1.489 g) 用硅胶色谱依次用二氯甲烷- 石油醚- 甲醇（1 ∶1 ∶0 ～50 ∶0 ∶1 ）为流动相洗脱得到组分Fr. 2.1.3.1 ～2.1.3.6 。Fr. 2.1.3.2 经硅胶柱色谱，石油醚- 醋酸乙酯（10 ∶1 ～3 ∶1 ）洗脱和反相制备色谱（34% 乙腈水溶液，2 mL/min ）得到化合物4（13 mg ，tR ＝11.0 min ）。Fr. 2.1.3.5 经硅胶色谱，以石油醚- 醋酸乙酯（100 ∶1 ～0 ∶100 ）为流动相梯度洗脱后用凝胶（二氯甲烷- 甲醇1 ∶1 ），硅胶柱色谱[ 石油醚- 醋酸乙酯（1 ∶1 ）] 和制备色谱（37% 乙腈水溶液，2 mL/min ）得到化合物9（5.0 mg ，tR ＝21.6 min ），凝胶剩余洗脱液回收浓缩后再次经制备色谱（33% 甲醇水溶液，2 mL/min ）制备得到化合物5（11.9 mg ，tR ＝26.6 min ）和10（1.52 mg ，tR ＝22.1 min ）；Fr2.1.3.5 剩余洗脱液经制备色谱（47% 甲醇水溶液，2 mL/min ）制备得到化合物5（2.0 mg ，tR ＝14.0 min ）、6（13.4 mg ，tR ＝22.0 min ）、7（2.6 mg ，tR ＝16.0 min ）。
Fr. 2.2 先经MCI 柱（10% ～100% 甲醇）除去杂质，后经硅胶色谱以二氯甲烷- 甲醇（0 ∶1 ～50 ∶1 ）梯度洗脱和凝胶（甲醇）得到化合物8（215.2 mg ）。
Fr. 2.3 经MCI 柱（10% ～90% 甲醇）和硅胶色谱[ 石油醚- 醋酸乙酯（10 ∶1 ～1 ∶2 ）] ，洗脱得到组分Fr. 2.3.1 ～2.3.5 。Fr. 2.3.2 ～2.3.4 分别依次经过凝胶[ 二氯甲烷- 甲醇（1 ∶1 ）] 和制备色谱（2 mL/min ）制备得到化合物8（35% 甲醇水溶液，3.9 mg ，tR ＝28.0 min ）、10（37% 甲醇水溶液，3.9 mg ，tR ＝19.5 min ）、11（37% 甲醇水溶液，4.6 mg ，tR ＝23.6 min ）、1 2（43%甲醇水溶液，30.9 mg，tR＝21.6 min）和13（43%甲醇水溶液，2.2 mg，tR＝18.4 min）。Fr. 2.3.5经过制备色谱（20%甲醇～0.1%甲酸水溶液，2 mL/min）制备得到化合物14（3.1 mg，tR＝11.1 min）、15（3.8 mg，tR＝21.0 min）和16（32.7 mg，tR＝24.5 min）。
Fr. 4 以10% ～70% 甲醇水溶液为流动相经ODS 色谱得到化合物14（10 mg ），和组分Fr. 4.1 ～4.7 。Fr.4.5 经硅胶色谱以二氯甲烷- 醋酸乙酯（8 ∶1 ～1 ∶3 ）洗脱得到Fr. 4.5.1 ～4.5.5 。Fr. 4.5.1 ～4.5.2 经凝胶色谱分离得到化合物17（甲醇，381.9 mg ）和20[ 二氯甲烷- 甲醇（1 ∶1 ），3.56 mg] 。Fr. 4.5.3 经硅胶柱色谱，以石油醚- 醋酸乙酯（3 ∶1 ～1 ∶7.5 ）洗脱和制备色谱（32% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化 合物18（5.9 mg，tR＝35.0 min）和19（2.3 mg，tR＝24.0 min ）。Fr. 4.5.4 经制备色谱（33% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物21（2.8 mg ，tR ＝33.7 min ）。
Fr. 4.1 经ODS 色谱（70% ～100% 甲醇）得到组分Fr. 4.1.1 ～4.1.3 。Fr. 4.1.1 ～4.1.2 分别以硅胶色谱[ 石油醚- 丙酮（含1% 乙酸）（50 ∶1 ～1 ∶1 ）] 和凝胶（甲醇）分离后均结晶得到化合物37（共188.6 mg ），其余洗脱液合并为组分Fr. 4.1.1.1 ～4.1.1.2 。Fr. 4.1.1.1 经硅胶色谱以石油醚- 丙酮（100 ∶1 ～1 ∶1 ）洗脱和制备色谱（50% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物39（14.0 mg ，tR ＝20.0 min ）。Fr. 4.1.1.2 经硅胶色谱以二氯甲烷- 甲醇（100 ∶1 ～17.5 ∶1 ）洗脱和制备色谱（25% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物38（10.0 mg ，tR ＝22.5 min ）。Fr. 4.1.3 经凝胶色谱（甲醇）得到化合物40（153.2 mg ）。
Fr. 4.6 经过硅胶柱色谱，以二氯甲烷- 醋酸乙酯（50 ∶1 ～1 ∶4 ）洗脱得到组分Fr. 4.6.1 ～4.6.5 。Fr. 4.6.1 经过制备色谱（37% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物23（9.9 mg ，tR ＝24.0 min ）和12（0.75 mg ，tR ＝33.0 min ）。Fr. 4.6.2 经过凝胶[ 二氯甲烷- 甲醇（1 ∶1 ）] 和制备液相色谱（2 mL/min ）得到化合物17（32% 甲醇水溶液，4.5 mg ，tR ＝32.0 min ）、25（22% ～23% 乙腈-0.1% 三氟乙酸水溶液，4.0 mg ，tR ＝16.9 min, ）、23（22% ～23% 乙腈-0.1% 三氟乙酸水溶液，6.3 mg ，tR ＝24.3 min ）、24（22% ～23% 乙腈-0.1% 三氟乙酸水溶液，1.9 mg ，tR ＝28.7min ）、37（22%～23%乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液，5.8 mg，tR＝37.7 min ）和24（35% 甲醇-0.1% 甲酸水溶液，9.2 mg，tR＝30.0 min）。Fr. 4.6.3经凝胶[二氯甲烷-甲醇（1 ∶1 ）] 和制备色谱（38% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物22（19.1 mg ，tR ＝21.7 min ）。Fr. 4.6.5 经凝胶色谱[ 二氯甲烷- 甲醇（1 ∶1 ）] 、硅胶色谱[ 二氯甲烷- 醋酸乙酯（5 ∶1 ～1 ∶5 ）] 和制备液相色谱（33% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物26（13.3 mg ，tR ＝32.0 min ）和27（1.8 mg ，tR ＝24.0 min ）。
Fr. 4.7 使用硅胶柱色谱，二氯甲烷- 甲醇（50 ∶1 ～1 ∶1 ）为流动相梯度洗脱得到化合物28（9.6 mg ），其余洗脱液合并后得到组分Fr. 4.7.1 ～4.7.6 。Fr. 4.7.3 经凝胶柱色谱（甲醇）得到化合物29（5.0 mg ），其余洗脱液经硅胶色谱，以二氯甲烷- 醋酸乙酯（20 ∶1 ～1 ∶10 ）洗脱和制备液相色谱（45% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物31（144.2 mg ，tR ＝30.6 min）、32（6.0 mg，tR＝34.0 min）、1（3.0 mg，tR＝50.0 min）和33（13.7 mg，tR＝33.1 min）。Fr. 4.7.4经凝胶柱色谱（甲醇）得到化合物30（10.0 mg）。
取少量Fr. 5 经凝胶（甲醇）和制备液相色谱（45% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物34（25.0 mg ，tR ＝40.0 min ）和35（18.2 mg ，tR ＝36.5 min ）。取少量留样醋酸乙酯部位经制备色谱（90% ～100% 甲醇水溶液，2 mL/min ）得到化合物36（4.9 mg ，tR ＝20.7min ）。石油醚部位经硅胶色谱，以石油醚- 醋酸乙酯（100 ∶1 ～0 ∶100 ）洗脱后经制备液相色谱（33% 乙腈水溶液，2 mL/min ）得到化合物41（88.2 mg ，tR ＝32.5 min ）。
3 抗补体活性的测定
采用溶血法，参考实验室方法[9] 测定分离的40 个化合物的抗补体活性（化合物1因表征后剩余量不足未测），具体实验方法如下。
将5 ×BBT 缓冲溶液稀释为1 ×BBT 缓冲溶液。将绵羊血用1 ×BBT 缓冲溶液洗至上清无色后按比例稀释成2% 绵羊血细胞（2%SRBC ）。取适量溶血素母液，用1 ×BBT 缓冲溶液按1 ∶1 000 稀释即得溶血素。取适量补体，用1 ×BBT 缓冲溶液将补体稀释至最优效价（1 ∶80 ）即得最优效价补体（GPS ）。
将样品配制成适量初始浓度后倍比稀释至少8 个梯度，分别加100 μL 稀释好的样品到对照管和测定管中，在对照管中加入100 μL 1 ×BBT 缓冲液和100 μL 2% SRBC 混悬液，测定管中加入100 μL 溶血素和GPS 等比例的混合溶液及100 μL 2% SRBC 混悬液，不溶血对照管加入250 μL 1 ×BBT 缓冲液和50 μL 2% SRBC 混悬液，全溶血对照管加入250 μL 纯水和50 μL 2%SRBC 混悬液。37 ℃水浴孵育35 min 后离心（4 500 r/min 、4 ℃）5 min 。取上清200 μL 于96 孔板中，在405 nm 下测定吸光度（A ）值。肝素和苏拉明钠用作阳性对照。抗补体活性采用50% 抑制溶血所需的浓度（CH50 ）表示。
溶血抑制率＝1－(A测定－A对照)/(A全溶血－A不溶血)
4 结构鉴定
化合物1：黄色粉末或黄色油状物，易溶于甲醇，微溶于二氯甲烷，[α]20 D−2.12 °(c 0.1, CH3OH) 。高分辨质谱（HR-ESI-MS ）显示准分子离子峰[M －H]− 490.187 3 （calcd. for C28H28NO7 ，490.187 1 ），确定其分子式为C28H29NO7 ，不饱和度为15 。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) 谱（表1 ）中主要质子信号显示有：高场区显示2 个甲氧基信号[δH 3.88 (3H, s), 3.86 (3H, s)] ，2 个相互偶合的亚甲基信号[δH 2.84 (1H, dd, J= 13.5, 6.7 Hz), 2.80 (1H, dd, J = 13.5, 6.7 Hz), 2.67 (1H, m), 3.85 (1H, m)] ，推测2 个相互偶合的亚甲基可能与杂原子相连；还有4 个次甲基质子信号[δH 4.87 (1H, m), 3.39 (1H, dd, J = 9.2, 4.1 Hz), 4.19 (1H, d, J= 2.3 Hz), 2.91 (1H, m)] ；低场区显示出10 个苯环质子信号[δH 7.06 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.97 (1H, d, J = 1.8 Hz), 6.84 (1H, dd, J = 8.1, 1.8 Hz) , 6.78 (1H, d, J = 8.1 Hz), 6.82 (1H, d, J= 8.1 Hz), 6.71 (1H, d, J = 1.9 Hz), 6.65 (1H, dd, J = 8.1, 1.9 Hz)]，推测为1个1,4-二取代芳环质子信号和2个1,3,4-三取代芳环质子信号。13 C-NMR (150 MHz, CD3OD) 谱中给出了28个碳信号，包括1个羰基碳信号（δC 176.5）、18个芳香碳信号（δC 157.3, 149.6, 149.0, 147.9, 147.2, 133.9, 132.9, 131.1, 131.1, 130.7, 120.5, 119.6, 116.7, 116.3, 116.3, 116.1, 111.2, 110.9）、2个亚甲基碳信号(δC 33. 5, 43.4)、1个连氧亚甲基碳信号(δC74.3)、4个次甲基碳信号（δC85.0, 68.3, 56.2, 48.4）和2个甲氧基碳信号（δC56.4, 56.5）。查阅文献发现，化合物1与化合物(±)-4-(ethoxy(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) mthyl)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-N -(4-hydroxy-phenethyl)-tetrahydrofuran-3-carboxamide[10] （I）结构类似，与化合物I相比少了1个乙氧基信号，较化合物I多1个不饱和度。通过1 H-NMR和13 C-NMR结合HSQC以及分子式推测化合物1为四氢呋喃骨架的木脂素衍生物。
在HMBC 谱中（图1 ），H-5 与δC 147.2 (C-4) ，H-5' 与δC 147.9 (C-4') ，H-3 与δC 149.0 (C-3) 、H-3' 与δC 149.6 (C-3') 之间的相关信号，且NOESY 谱中显示H-3 与H-2 ，H-3' 与H-2' 的相关信号，说明化合物中的2 个甲氧基信号(H-3 和H-3') 分别位于苯环的3 或3' 位，2 个羟基位于4 或4' 位。HMBC 谱中的H-7 与δC 133.9 (C-1) 、δC 110.9 (C-2) 、δC119.6 (C-6) ，H-7' 与δC132.9 (C-1') 、δC 111.2 (C-2') 、δC120.5 (C-6') ，H-7'' 与δC 130.7 (C-1'') 、δC131.1 (C-2'', 6'') 之间的相关信号及1H-1H COSY 谱中H-8'' [δH 3.85, (1H, m)] 与H-7'' [δH 2.67 (1H, m)] 的相关信号确定了3 个苯环的连接位置，分别是1 位所在苯环与7 位相连，1' 位所在苯环与7' 位相连，1'' 位所在苯环与7'' 位相连。1H-1H COSY 谱中出现H-8 与H-7 、H-8'，H-8'与H-7'、H-9'的相关片段，进一步确认了该化合物为四氢呋喃型木脂素。HMBC谱中还显示了H-8、H-8''以及H-7'与C-9的相关信号，确定C-7'、C-8'、C-8、C-9以及N 原子形成1个五元环结构，且四氢呋喃环与新的五元环为骈双环结构。
化合物1的相对构型根据旋光、H-7 、H-7' 偶合常数，C-1 、C-1' 化学位移和NOESY 谱确定。由于以甲醇为溶剂的二维核磁共振谱中部分信号被掩盖，补充了以氯仿为溶剂的一维、二维核磁共振谱。在1H-NMR (600 MHz, CDCl3) 谱中，H-7 [δH 5.06 (1H, d, J= 3.9 Hz)] 、H-7' [δH4.02 (1H, d, J = 2.3 Hz)] 偶合常数在2.0 ～4.0 Hz ，推测H-7 、H-7' 朝向相同，且与H-8 、H-8' 朝向不同[11] ；[α]20 D−2.12 °(c 0.1, CH3OH) ，δC-1 和δC-1' 均超过130 ，且NOESY 谱中显示H-7 与H-7' 相关，结合文献报道[12-13] ，确定H-7 、H-7' 为α 朝向，H-8 、H-8' 为β 朝向。至此，确定化合物的结构为( －)-3,6-bis(4-hydroxy-3-methoxy- phenyl)-5-(4-hydroxyphenethyl)hexahydro-4H-furo[3,4-c] pyrrol-4-one ，查阅数据库发现该化合物为新化合物，命名为水柏枝脂素A （myricarian A ）。
化合物2：白色粉末，ESI-MS m/z: 211 [M －H]− ，分子式为C10H12O5 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.31 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.20 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-6), 5.85 (1H, s, -OH), 3.97 (3H, s, -OCH3), 3.91 (3H, s, -OCH3), 3.89 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 166.7 (C-7), 151.9 (C-5), 149.0 (C-3), 139.4 ( C-4), 125.7 (C-1), 109.9 (C-2), 105.7 (C-6), 61.0 (-OCH3), 56.1 (-OCH3), 52.2(-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[14] ，故鉴定化合物2为3- 羟基-4,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯。
化合物3：白色粉末，ESI-MS m/z: 181 [M －H]− ，分子式为C9H10O4 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.64 (1H, dd, J = 8.3, 1.9 Hz, H-6), 7.55 (1H, d, J = 1.9 H z, H-2), 6.95 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5), 5.31 (1H, s, -OH),3.96 (3H, s, -OCH3), 3.89 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 166.9 (C-7), 150.0 (C-3), 146.2 (C-4), 124.2 (C-6), 122.3 (C-1), 114.1 (C-5), 111.7 (C-2), 56.1 (-OCH3), 52.0 (-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[15] ，故鉴定化合物3为3- 羟基-4- 甲氧基苯甲酸甲酯。
化合物4：黄色粉末，ESI-MS m/z: 151 [M －H]− ，分子式为C8H8O3 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.83 (1H, s, -CHO), 7.46 ～7.40 (2H, m, H-6, 2), 7.08 ～7.01 (1H, m, H-5), 6.35 (1H, s, -OH), 3.96 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 191.0 (-CHO), 151.7 (C-4), 147.2 (C-3), 129.9 (C-1), 127.6 (C-6), 114.4 (C-5), 108.8 (C-2), 56.1(-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[16] ，故鉴定化合物4为香草醛。
化合物5：白色粉末，ESI-MS m/z: 165 [M －H]− ，分子式为C9H10O3 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.56 (1H, dd, J = 8.3, 2.0 Hz, H-6), 7.52 (1H, d, J = 2.0 H z, H-2), 6.85 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5), 3.89 (3H, s, -OCH3),2.53 (3H, s, -CH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 199.5 (C-7), 153.5 (C-4), 149.1 (C-3), 130.6 (C-1), 125.2 (C-6), 115.8 (C-5), 111.9 (C-2), 56.4 (-OCH3), 26.3 (-CH3) 。以上数据与文献报道一致[17] ，故鉴定化合物5为罗布麻宁。
化合物6：白色粉末，ESI-MS m/z: 211 [M －H]− ，分子式为C10H12O5 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.32 (2H, s, H-2, 6), 3.94 (6H, s, -OCH3), 3.90 (3H, s, -CH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 166.9 (C-7), 146.6 (C-3, 5), 139.2 (C-4), 121.1 (C-1), 106.6 (C-2, 6), 56.4 (3, 5-OCH3), 52.1 (C-8) 。以上数据与文献报道一致[18] ，故鉴定化合物6为丁香酸甲酯。
化合物7：白色粉末，ESI-MS m/z: 177 [M －H]− ，分子式为C10H10O3 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.66 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-9), 7.41 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 7.13 (1H, d, J = 8.2, H-5), 7.07 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-3), 6.97 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6), 6.60 (1H, dd, J= 15.8, 7.7 Hz, H-8), 3.96 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 193.6 (C-9), 153.1 (C-7), 148.9 (C-4), 146.9 (C-3), 126.7 (C-1), 126.5 (C-8), 124.1 (C-6), 114.9 (C-5), 109.4 (C-3), 56.0 (-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[19] ，故鉴定化合物7为松柏醛。
化合物8：白色粉末，ESI-MS m/z: 197 [M －H]− ，分子式为C9H10O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.15 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-6), 7.11 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 3.83 (3H, s, -OCH3), 3.80 (3H, s, -OCH3) ；13C- NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 167.5 (C-7), 147.7 (C-5), 144.8 (C-3), 139.2 (C-4), 120.0 (C-1), 110.5 (C-2), 104.7 (C-6), 55.3 (-OCH3), 51.1 (-OCH3) 。以上数据 与文献报道一致[20]，故鉴定化合物8为3,4-二羟基-5- 甲氧基苯甲酸甲酯。
化合物9：白色粉末，ESI-MS m/z: 209 [M ＋H]+ ，分子式为C11H12O4 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.57 (1H, d, J = 16.1 Hz, H-7), 7.07 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 7.04 (1H, dd, J = 8.2, 2.2 Hz, H-6), 6.94 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5) , 6.31 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8), 3.88 (3H, s, -OCH3), 3.76 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.6 (C-9), 151.6 (C-4), 148.1 (C-3), 146.6 (C-7), 128.9 (C-1), 122.8 (C-6), 115.9 (C-8), 114.8 (C-5), 112.6 (C-2), 56.4 (-OCH3), 52.1 (-OCH3) 。以上数据结合文献报道[21-22] ，鉴定化合物9为异阿魏酸甲酯。
化合物10：白色粉末，溶于丙酮、甲醇。ESI-MS m/z: 121 [M －H]− ，分子式为C7H6O2 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 9.76 (1H, s, -CHO), 7.81 ～7.74 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2, 6), 6.95 ～6.87 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3, 5) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 192.9 (C-7), 165.3 (C-4), 133.5 (C-2, 6), 130.4 (C-1), 116.9 (C-3, 5) 。以上数据与文献报道一致[23] ，鉴定化合物10为对羟基苯甲醛。
化合物11：白色粉末，溶于丙酮、甲醇。ESI-MS m/z: 135 [M －H]− ，分子式为C8H8O2 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.92 ～7.85 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.86 ～6.81 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, 5), 2.52 (3H, s, -CH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 199.6 (C-7), 164.0 (C-4), 132.2 (C-2, 6), 130.3 (C-1), 116.3 (C-3, 5), 26.3 (-CH3) 。以上数据与文献报道一致[24] ，故鉴定化合物11为对羟基苯乙酮。
化合物12：白色粉末。ESI-MS m/z: 195 [M －H]− ，分子式为C11H16O3 ，[α]20 D−92.9 °(c 0.13, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.67 (1H, s, H-7), 4.31 (1H, m, H-3), 2.46 (1H, dt, J = 13.7, 2.7 Hz, H-4b), 1.98 (1H, dt, J = 14.5, 2.7 Hz, H-2b), 1.77 (3H, s, H-11), 1.76 ～1.71 (1H, dd, J = 13.7, 3.9 Hz, H-4a), 1.53 (1H, dd, J = 14.5, 3.8 Hz, H-2a), 1.45 (3H, s, H-9), 1.25 (3H, s, H-10) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 183.0 (C-6), 172.3 (C-8), 112.7 (C-7), 87.1 (C-5), 66.6 (C-3), 47.2 (C-2), 45.6 (C-4), 36.0 (C-1), 30.6 (C-10), 27.0 (C-11), 26.4 (C-9) 。以上数据与文献报道数据一致[25] ，故鉴定化合物12为黑麦草内酯。
化合物13：白色粉末，ESI-MS m/z: 267 [M ＋COOH －H]− ，分子式为C13H18O3 ，[α]20 D ＋44.6 °(c 0.13, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.00 (1H, dd, J = 15.8, 0.7 Hz, H-7), 6.43 (1H, dd, J = 15.8, 0.7 Hz, H-8), 5.93 (1H, s, H-4), 2.61 (1H, d, J = 17.1 Hz, H-2b), 2.30 (3H, s, H-10), 2.27 (1H, d, J = 17.1 Hz, H-2b), 1.89 (3H, s, H-13), 1.06 (3H, s, H-11), 1.01 (3H, s, H-12) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 199.3 (C-9), 199.0(C-3), 163.3 (C-5), 147.0 (C-7), 130.3 (C-8), 126.6 (C-4), 78.6 (C-6), 49.1 (C-2), 41.2 (C-1), 26.2 (C-10), 23.3 (C-12), 22.1 (C-11), 17.7 (C-13) 。以上数据与文献报道一致[26] ，故鉴定化合物13为（＋）- 去氢催吐萝芙木醇。
化合物14：白色粉末，ESI-MS m/z: 169 [M －H]− ，分子式为C7H6O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.05 (2H, d, J = 0.7 Hz, H-2, 6) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 170.2 (C-7), 146.3 (C-3, 5), 139.5 (C-4), 121.8 (C-1), 110.2 (C-2, 6) 。以上数据与文献报道基本一致[27] ，故鉴定化合物14为没食子酸。
化合物15：白色粉末，ESI-MS m/z: 153 [M －H]− ，分子式为C7H6O4 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.42 (2H, d, J = 9.2 Hz, H-2, H-6), 6.79 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 170.7 (-COOH), 151.4 (C-4), 146.1 (C-3), 124.0 (C-1), 123.9 (C-6), 117.8 (C-2), 115.8 (C-5) 。以上数据与文献报道基本一致[28] ，故鉴定化合物15为原儿茶酸。
化合物16：白色粉末，ESI-MS m/z: 183 [M －H]− ，分子式为C8H8O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.19 (1H, s, H-6), 7.18 (1H, s, H-2), 3.86 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 170.4 (C-7), 149.1 (C-5), 146.2 (C-3), 140.5 (C-4), 122.1 (C-11), 112.2 (C-2), 106.4 (C-6), 56.7 (-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[29] ，故鉴定化合物16为3-O- 甲基没食子酸。
化合物17：白色粉末，ESI-MS m/z: 197 [M －H]− ，分子式为C9H10O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.04 (2H, d, J = 0.8 Hz, H-2, 6), 4.26 (2H, qd, J = 7.1, 0.8 Hz, H-1'), 1.33 (3H, td, J = 7.1, 0.8 Hz, H-2') ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 168.6 (C-7), 146.1 (C-3, 5), 139.7 (C-4), 121.8 (C-1), 110.1 (C-2, 6), 6 1.7 (C-2'), 14.7 (C-1')。以上数据与文献报道一致[30]，故鉴定化合物17为没食子酸乙酯。
化合物18：白色粉末，ESI-MS m/z: 269 [M ＋COOH －H]− ，分子式为C13H20O3 ，[α]20 D ＋148.9 °(c 0.19, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.87 (1H, s, H-4), 5.79 (1H, dd, J = 4.2, 0.7 Hz, H-7), 5.78 (1H, m,H-8), 4.32 (1H, m, H-9), 2.48 (1H, d, J = 16.9 Hz, H-2a), 2.16 (1H, d, J = 16.9 Hz, H-2b), 1.91 (3H, s, H-11), 1.24 (3H, dd, J = 6.4, 0.7 Hz, H-10), 1.04 (3H, s, H-12), 1.02 (3H, s, H-12) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 201.3 (C-3), 167.5 (C-5), 137.0 (C-8), 130.0 (C-7), 127.2 (C-4), 80.0 (C-6), 68.7 (C-9), 50.8 (C-2), 42.5 (C-1), 24.5 (C-13), 23.9 (C-10), 23.5(C-12), 19.6 (C-11) 。以上数据与文献报道一致[31] ，故鉴定化合物18为吐叶醇。
化合物19：白色粉末，ESI-MS m/z: 241 [M －H]− ，分子式为C13H22O4 ，[α]20 D ＋46.1 °(c 0.09, CH3OH) 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.46 (1H, d, J = 16.3 Hz, H-7), 6.35 (1H, d, J = 16.3 Hz, H-8), 4.15 ～4.10 (1H, m, H-3), 2.31 (3H, s, -CH3), 2.04 (1H, dd, J = 14.1, 3.4 Hz, H-2a), 1.84 (1H, dd, J = 14.3, 3.5 Hz, H-2b), 1.75 (1H, ddd, J = 14.2, 4.6, 1.8 Hz, H-4a), 1.61 (1H, ddd, J = 14.3, 4.6, 1.8 Hz, H-4b), 1.25 (3H, s, -CH3), 1.13 (3H, s, -CH3), 0.90 (3H, s, -CH3) ；13C- NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 199.7 (C-9), 151.4 (C-8), 130.1 (C-7), 79.6 (C-6), 76.0 (C-5), 67.4 (C-3), 42.6 (C-2), 39.8 (C-4), 37.7 (C-1), 27.5 (C-11), 26.4 (C-13), 25.7 (C-12), 24.9 (C-10) 。结合文献报道[32] ，鉴定化合物19为3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one 。
化合物20：白色粉末，ESI-MS m/z: 179 [M －H]− ，分子式为C9H8O4 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.52 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-7), 7.03 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-2), 6.93 (1H, dd, J = 8.1, 2.1 Hz, H-6), 6.77 (1H, dd, J = 8.1, 0.8 Hz, H-5), 6.21 (1H, dd, J = 15.9, 0.8 Hz, H-8) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 171.1 (C-9), 149.5 (C-4), 147.1 (C-7), 146.9 (C-3), 127.9 (C-1), 122.9 (C-6), 116.6 (C-8), 115.7 (C-2), 115.1 (C-5) 。以上数据与文献报道一致[27] ，故鉴定化合物20为咖啡酸。
化合物21：白色粉末，ESI-MS m/z: 247 [M ＋Na]+ ，分子式为C13H20O3 ，[α]20 D ＋29.5 °(c 0.14, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.83 (1H, s, H-8), 4.21 (1H, tt, J = 11.5, 4.1 Hz, H-4), 2.23 ～2.17 (1H, m, H-5a), 2.19 (3H, s, -CH3), 1.93 (1H, ddd, J = 12.6, 4.3, 2.1 Hz, H-5b), 1.38 (7H, m, H-11, 12, 3a), 1.37 ～1.30 (1H, m, H-3b), 1.15 (3H, s, H-13) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 211.4 (C-7), 200.8 (C-9), 119.9 (C-6), 101.0 (C-8), 72.3 (C-5), 64.3 (C-3), 49.8 (C-4), 49.6 (C-2), 36.9 (C-1), 32.2 (C-12), 30.7 (C-13), 2 9.2 (C-11), 26.4 (C-10)。以上数据与文献报道一致[33]，故鉴定化合物21为蚱蜢酮。
化合物22：黄色粉末，ESI-MS m/z: 303 [M －H]− ，分子式为C15H12O7 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.96 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2'), 6.84 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6'), 6.80 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'), 5.92 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-8), 5.88 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 4.92 (1H, m, H-2), 4.50 (1H, d, J = 11.5 Hz, H-3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 197.0 (C-4), 167.3 (C-8a), 163.9 (C-7), 163.1 (C-5), 145.7 (C-3'), 144.9 (C-4'), 128.5 (C-1'), 119.5 (C-6'), 114.7 (C-5'), 114.5 (C-2'), 100.4 (C-6), 95.9 (C-8), 94.9 (C-4a), 83.7 (C-2), 72.3 (C-3) 。以上数据与文献报道一致[34] ，故鉴定化合物22为花旗松素。
化合物23：白色粉末，ESI-MS m/z: 197 [M －H]− ，分子式为C9H10O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.18 (1H, dd, J = 2.0, 0.8 Hz, H-2), 7.17 (1H, dd, J = 2.0, 0.8 Hz, H-6), 3.87 (3H, s, -OCH3), 3.84 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.7 (C-7), 154.4 (C-3), 151.6 (C-5), 142.0 (C-4), 127.3 (C-1), 112.4 (C-6), 106.4 (C-2), 61.2 (-OCH3), 56.7 (-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[35] ，故鉴定化合物23为3- 羟基-4,5- 二甲氧基苯甲酸。
化合物24：白色粉末，ESI-MS m/z: 163 [M －H]− ，分子式为C9H8O3 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.59 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 7.48 ～7.41 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2, 6), 6.83 ～6.77 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3, 5), 6.28 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-8) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.9 (C-9), 159.7 (C-4), 145.0 (C-7), 129.7 (C-3), 129.6(C-5), 125.9 (C-1), 115.4 (C-2), 115.3 (C-6), 114.6 (C-8)。以上数据与文献报道一致[36]，故鉴定化合物24为对香豆素。
化合物25：白色粉末，ESI-MS m/z: 197 [M －H]− ，分子式为C9H10O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.33 (2H, d, J = 0.7 Hz, H-2, 6), 3.88 (6H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 167.0 (-COOH), 148.9 (C-3, 5), 141.9 (C-4), 122.0 (C-1), 108.4 (C-2, 6), 56.9 (-OCH3) 。以上数据与文献报道基本一致[35] ，故鉴定化合物25为丁香酸。
化合物26：白色粉末，ESI-MS m/z: 359 [M －H]− ，分子式为C20H24O6 ，[α]20 D ＋3.39 °(c 0.11, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.74 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6), 6.67 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 6.65 (1H, s, H-2'), 6.61 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-5), 6.18 (1H, s H-5'), 3.82 (1H, s, H-7), 3.80 (3H, s, -OCH3), 3.77 (3H, s, -OCH3), 3.73 ～3.63 (3H, m, H-9'a, 9a, 9b), 3.40 (1H, m, H-9'b), 2.78 (2H, d, J = 7.7 Hz, H-7'), 2.08 ～1.95 (1H, m, H-8'), 1.76 (1H, m, H-8) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 147.6 (C-3), 145.8 (C-3'), 144.6 (C-4), 143.9 (C-4'), 137.3 (C-1), 132.8 (C-6'), 127.6 (C-1'), 121.8 (C-6), 116.0 (C-5'), 114.6 (C-5), 112.4 (C-2), 111.0 (C-2'), 64.6 (C-9'), 60.8 (C-9), 55.1 (-OCH3), 55.0 (-OCH3), 46.7 (C-7), 46.6 (C-8), 38.6 (C-8'), 32.2 (C-7') 。以上数据与文献报道一致[37] ，故鉴定化合物26为异落叶松脂素。
化合物27：白色粉末，ESI-MS m/z: 359 [M －H]− ，分子式为C20H24O6 ，[α]20 D−2.56 °(c 0.08, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.70 (1H, s, H-2'), 6.67 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 6.65 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.45 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6), 6.35 (1H, s, H-5'), 4.20 (1H, d, J = 3.6 Hz, H-7), 3.83 (3H, s, -OCH3), 3.75 (3H, s, -OCH3), 3.63 ～3.55 (2H, m, H-9'), 3.52 (1H, dd, J = 9.4, 5.1 Hz, H-9a), 3.39 (1H, m, H-9b), 2.99 ～2.89 (1H, m, H-7'a), 2.64 (1H, dd, J = 16.0, 8.1 Hz, H-7'b), 2.04 (2H, m, H-8', 8) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 148.3 (C-3), 147.9 (C-3'), 145.9 (C-4), 145.6 (C-4'), 136.0 (C-1), 133.2 (C-6'), 128.5 (C-1'), 124.1 (C-6), 117.2 (C-5'), 115.5 (C-5), 115.3 (C-2), 112.4 (C-2'), 65.6 (C-9'), 63.5 (C-9), 56.9 (3, 3'-OCH3), 46.7 (C-7), 44.8 (C-8), 35.6 (C-8'), 33.1 (C-7') 。以上数据与文献报道一致[38] ，故鉴定化合物27为burselignan 。
化合物28：白色粉末，ESI-MS m/z: 207 [M －H]− ，分子式为C13H20O2 。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.31 (1H, dd, J = 2.4, 0.9 Hz, H-3), 7.09 (1H, ddd, J = 8.2, 2.5, 1.0 Hz, H-5), 6.61 (1H, dd, J = 8.2, 1.0 Hz, H-6), 1.43 (6H, s, H-6', 7'), 1.31 (6H, s, H-4', 5'), 1.27 (3H, s, H-3') ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 151.8 (C-1), 143.0 (C-2), 135.2 (C-4), 124.1 (C-3), 123.5 (C-5), 115.9 (C-6), 34.7 (C-1'), 34.3 (C-2'), 31.6 (C-4', 5'), 29.7 (C-3', 6', 7') 。以上数据与文献报道一致[39] ，故鉴定化合物28为4-(1',1',2',2'-tetramethylpropyl)-1,2-benzenediol 。
化合物29：黄色粉末，ESI-MS m/z: 287 [M －H]− ，分子式为C15H12O6 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.35 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2', 6'), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3', 5'), 5.92 (1H, dd, J = 2.0, 0.7 Hz, H-8), 5.88 (1H, dd, J = 2.0, 0.7 Hz, H-6), 4.98 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-2), 4.54 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 197.1 (C-4), 167.3 (C-7), 163.9 (C-5), 163.2 (C-9), 157.8 (C-4'), 129.0 (C-2', 6'), 127.9 (C-1'), 114.7 (C-3', 5'), 100.5 (C-10), 95.9 (C-6), 94.9 (C-8), 83.6 (C-2), 72.2 (C-3) 。以上数据与文献报道一致[34] ，故鉴定化合物29为二氢山柰酚。
化合物30：黄色粉末，ESI-MS m/z: 301 [M －H]−，分子式为C15H10O7。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.69 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-2'), 7.55 (1H, dd, J = 8.5, 2.2 Hz, H-6'), 6.90 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5'), 6.42 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 6.20 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8) ；13C-NMR (150 MHz, DMSO -d6) δ: 176.3 (C-4), 164.3 (C-7), 160.9 (C-5), 156.6 (C-9), 147.3 (C-3'), 147.2 (C-2), 145.4 (C-4'), 136.2 (C-3), 122.4 (C-1'), 120.4 (C-6'), 116.0 (C-2'), 115.5 (C-5'), 103.5 (C-10), 98.6 (C-6), 93.8 (C-8) 。以上数据与文献报道一致[34] ，故鉴定化合物30为槲皮素。
化合物31：白色粉末，ESI-MS m/z: 312 [M －H]− ，分子式为C18H19NO4 。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.44 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-b), 7.09 (1H, d, J = 1.9 Hz, -CONH-), 7.06 ～7.02 (2H, m, H-3', 6'), 7.01 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6''), 6.79 (1H, dd, J = 8.2, 0.7 Hz, H-3''), 6.76 ～6.66 (2H, m, H-2', 5'), 6.40 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-a), 3.85 (3H, s, -OCH3), 3.50 ～3.42 (2H, m, H-2), 2.74 (2H, t,J = 7.3 Hz, H-1) ；13C- NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 167.8 (C-1), 155.5 (C-4''), 148.5 (C-1'), 147.9 (C-4'), 140.7 (C-2), 129.9 (C-1''), 129.4 (C-2'', 6''), 126.9 (C-3'), 121.9 (C-6'), 117.4 (C-2'), 115.1 (C-5'), 114.9 (C-3'', 5''), 110.2 (C-3), 55.0 (-OCH3), 41.2 (C-a), 34.4 (C-b) 。以上数据与文献报道一致[40] ，故鉴定化合物31为N- 反式- 阿魏酰酪胺。
化合物32：白色油状物，ESI-MS m/z: 326 [M－H]− ，分子式为C18H17NO5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.92 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2', 6'), 7.49 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-7), 7.17 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.06 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6), 6.87 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3', 5'), 6.81 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 6.62 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8), 4.75 (2H, s, H-8'), 3.90 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 193.3 (C-7'), 168.1 (C-9), 163.1 (C-4'), 148.6 (C-4), 147.9 (C-3), 141.2 (C-7), 130.2 (C-2', 6'), 126.8 (C-1), 126.6 (C-1'), 122.0 (C-6), 117.0 (C-8), 115.1 (C-3', 5'), 115.0 (C-5), 110.2 (C-2), 55.0 (-OCH3), 45.8 (C-8') 。以上数据与文献报道一致[41] ，故鉴定化合物32为terrestiamide 。
化合物33：白色粉末，ESI-MS m/z: 342 [M －H]− ，分子式为C19H21NO5 ，[α]20 D ＋20.0 °(c 0.1, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.44 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-7), 7.17 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-5), 7.13 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 7.03 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6), 6.80 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-3'), 6.79 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-5'), 6.48 (1H, dd, J = 15.7, 0.6 Hz, H-8), 4.25 (1H, dd, J = 8.4, 4.5 Hz, H-7'), 3.89 (3H, s, -OCH3), 3.51 (1H, dd, J = 13.7, 4.6 Hz, H-8'a), 3.40 (1H, dd, J = 13.7, 8.3 Hz, H-8'b), 3.21 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 167.8 (C-9), 157.2 (C-4'), 148.5 (C-4), 147.9 (C-3), 140.8 (C-7), 130.1 (C-1'), 127.8 (C-2', 6'), 126.9 (C-1), 121.9 (C-6), 117.3 (C-8), 115.1 (C-5), 114.9 (C-3', 5'), 110.1 (C-2), 81.9 (C-7'), 55.4 (-OCH3), 55.0 (-OCH3), 45.7 (C-8') 。以上数据与文献报道一致[42-43] ，故鉴定化合物33为(R)-3-(4-h ydroxy-3-methoxyphenyl)-N-[2-(4hydroxyphenyl)-2-methoxethyl]acrylamide 。
化合物34：白色粉末，ESI-MS m/z: 329 [M －H]− ，分子式为C18H34O5 。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.56 (2H, dd, J = 4.0, 2.4 Hz, H-9, 10), 3.90 (1H, m, H-8), 3.77 (1H, dt, J = 4.1, 2.1 Hz, H-11), 3.23 (1H, ddd, J = 8.3, 5.8, 2.4 Hz, H-12), 2.18 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-2), 1.69 ～1.08 (20H, m, H-3 ～8, 13 ～17), 0.85 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18) ；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 174.9 (C-1), 135.0 (C-10), 129.9 (C-9), 74.7 (C-11), 74.2 (C-12), 71.0 (C-8), 37.9 (C-7), 34.1 (C-2), 32.3 (C-16), 32.0 (C-13), 29.5 (C-5), 29.3 (C-15), 29.0 (C-4), 25.6 (C-14), 25.4 (C-6), 25.0 (C-3), 22.6 (C-17), 14.4 (C-18) 。以上数据与文献报道一致[44] ，故鉴定化合物34为(Z)-8,11,12-trihydroxy-9-octadecanoic acid 。
化合物35：白色粉末，ESI-MS m/z: 327 [M －H]− ，分子式为C18H32O5 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.73 ～5.70 (2H, m, H-10, 11), 5.47 ～5.44 (2H, m, H-15, 16), 4.05 (1H, m, H-9), 3.96 (1H, t, J = 5.2 Hz, H-12), 3.45 (1H, ddd, J = 8.3, 5.6, 4.3 Hz, H-13), 2.35 (1H, ddd, J = 15.1, 6.3, 4.6 Hz, H-14a), 2.27 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-2), 2.18 ～2.09 (1H, m, H-14b), 2.08 (1H, d, J = 3.0 Hz, H-17a), 2.07-2.03 (1H, m, H-17b), 1.64 ～1.26 (16H, m, H-2 ～8), 0.96 (3H, t, J = 7.5 Hz, H-18) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 177.7 (C-1), 136.6 (C-10), 134.4 (C-16), 131.1 (C-11), 126.4 (C-15), 75.9 (C-13), 75.8 (C-12), 73.1 (C-9), 38.4 (C-8), 35.0 (C-2), 31.6 (C-14), 30.6 (C-4), 30.4 (C-5), 30.2 (C-6), 26.5 (C-7), 26.1 (C-3), 21.7 (C-17), 14.6 (C-18) 。以上数据与文献报道一致[45] ，故鉴定化合物35为9,12,13-trihydroxy-10,15-octadecadienoic acid 。
化合物36：白色粉末，ESI-MS m/z: 617 [M －H]− ，分子式为C39H54O6 ，[α]20 D−19.88 °(c 0.17, CH3OH) 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.52 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-3'), 7.04 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2''), 6.94 (1H, dd, J = 8.2, 2.2 Hz, H-6''), 6.77 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5''), 6.30 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-2'), 5.53 (1H, m, H-15), 4.72 (1H, d, J = 2.9 Hz, H-3), 2.40 (2H, m, H-16a, 18), 2.00 (3H, m, H-16b, 2), 1.79 (1H, m, H-7a), 1.70 (1H, m, H-22a), 1.67 (1H, m, H-12a), 1.65 (1H, m, H-11b), 1.60 (2H, m, H-12b, 21a), 1.58 (2H, m, H-9, H-6a), 1.55 (1H, m, H-11a), 1.50 (1H, m, H-22b), 1.40 (2H, m, H-6b, 7b), 1.32 (3H, m, H-1, H-5), 1.23 (1H, m, H-19a), 1.10 (1H, m, H-19b), 1.05 (1H, m, H-21b), 0.96 (9H, m, -CH3), 0.94 (3H, s, -CH3), 0.93 (3H, s, -CH3), 0.92 (3H, s, -CH3), 0.89 (3H, s, -CH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 181.8 (C-28), 169.0 (C-1'), 161.9 (C-14), 149.6 (C-4''), 146.8 (C-3'), 146.7 (C-3''), 127.8 (C-1''), 123.0 (C-6''), 118.0 (C-5''), 116.6 (C-15), 115.7 (C-2'), 115.3 (C-2''), 79.6 (C-3), 52.2 (C-17), 51.8 (C-5), 50.6 (C-9), 43.1 (C-18), 42.5 (C-7), 40.4 (C-8), 39.3 (C-4), 38.6 (C-13), 37.9 (C-10), 36.7 (C-1), 34.9 (C-19), 34.7 (C-21), 34.4 (C-12), 32.9 (C-16), 32.5 (C-29), 32.2 (C-22), 30.2 (C-20), 29.4 (C-30), 28.5 (C-23), 26.8 (C-26), 23.8 (C-2), 23.0 (C-27), 22.3 (C-24), 19.7 (C-6), 18.5 (C-11), 15.9 (C-25) 。以上数据与文献报道一致[46] ，故鉴定化合物36为水柏枝素A 。
化合物37：白色结晶（甲醇），ESI-MS m/z: 193 [M －H]− ，分子式为C10H10O4 。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.55 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-7), 7.06 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-5), 7.04 (1H, dd, J = 8.2, 2.2 Hz, H-2), 6.94 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6), 6.26 (1H, dd, J = 15.9, 0.8 Hz, H-8), 3.88 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 170.9 (C-9), 151.5 (C-4), 148.1 (C-2), 146.7 (C-7), 129.0 (C-1), 122.7 (C-6), 116.7 (C-8), 114.8 (C-5), 112.6 (C-2), 56.4 (-OCH3) 。以上数据与文献报道一致[21] ，故鉴定化合物37为异阿魏酸。
化合物38：白色粉末，ESI-MS m/z: 137 [M －H]− ，分子式为C7H6O3 。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 9.69 (1H, s, H-7), 7.33 ～7.28 (2H, m, H-2, 6), 6.91 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-5) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 191.7 (C-7), 152.4 (C-4), 145.8 (C-3), 129.4 (C-1), 125.0 (C-6), 114.9 (C-2), 113.9 (C-5) 。以上数据与文献报道一致[47] ，故鉴定化合物38为原儿茶醛。
化合物39：白色油状物，ESI-MS m/z: 342 [M－H]− ，分子式为C19H21O5 。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.44 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-7), 7.11 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.02 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6), 6.81 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2'), 6.79 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.72 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-5'), 6.66 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, H-6'), 6.41 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8), 3.87 (3H, s, -OCH3), 3.82 (3H, s, -OCH3), 3.48 (2H, dd, J = 7.9, 6.7 Hz, H-8'), 2.76 (2H, t, J = 7.9 Hz, H-7') ；13C- NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.2 (C-9), 149.9 (C-4), 149.3 (C-3), 148.9 (C-4'), 146.0 (C-3'), 142.0 (C-7), 132.0 (C-1'), 128.3 (C-1), 123.2 (C-6), 122.3 (C-6'), 118.8 (C-8), 116.5 (C-5), 116.2 (C-5'), 113.4 (C-2'), 111.5 (C-2), 56.4 (-OCH3), 56.3 (-OCH3), 42.5 (C-8'), 36.2 (C-7') 。以上数据与文献报道一致[48] ，故鉴定化合物39为N- 反式- 阿魏酰-3- 甲氧基酪胺。
化合物40：黄色粉末，ESI-MS m/z: 285 [M －H]−，分子式为C15H10O6。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 8.10 (2H, dd, J = 6.8, 2.0 Hz, H-2', 6'), 6.91 (2H, dd, J =6.8, 2.0 Hz, H-3', 5'), 6.40 (1H, dd, J = 2.1, 0.8 Hz, H-8), 6.18 (1H, dd, J = 2.0, 0.7 Hz, H-6) ；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 176.0 (C-4), 164.2 (C-7), 161.2 (C-9), 159.2 (C-4'), 156.9 (C-5), 146.7 (C-2), 135.8 (C-3), 129.3 (C-2', 6'), 122.3 (C-1'), 114.9 (C-3', 5'), 103.2 (C-10), 97.9 (C-6), 93.1 (C-8) 。以上数据与文献报道一致[49] ，故鉴定化合物40为山柰酚。
化合物41：白色结晶（甲醇），ESI-MS m/z: 181 [M －H]− ，分子式为C9H10O4 。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.66 (1H, dd, J = 8.3, 1.9 Hz, H-5), 7.57 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 6.96 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-6), 3.97 (3H, s, -OCH3), 3.91 (3H, s, -OCH3) ；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 166.9 (C-7), 150.0 (C-3), 146.2 (C-4), 124.2 (C-6), 122.3 (C-1), 114.1 (C-5), 111.7 (C-2), 56.1 (-OCH3), 52.0 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[50]，故鉴定化合物41为香草酸甲酯。
5 抗补体活性
采用溶血法对化合物2～41的抗补体活性进行了检测，结果见表2 。共有26 个化合物具有抗补体活性。其中，16 个酚酸及其衍生物中有13 个化合物（2、4～6、8、10～11、14～15、17、23、25、38）具有补体抑制活性，CH50值为（0.20±0.03）～（4.72±0.01）mmol/L。黄酮类化合物（22、29、30、40）全部有活性，且均低于1.5 mmol/L。木脂素类化合物26、27的CH50值分别为（2.45±0.01）mmol/L和（0.21±0.01）mmol/L。4个酚酰胺类化合物中32活性较强，CH50为（0.68±0.05）mmol/L，31和39活性较弱，CH50值分别为（3.54±0.01）mmol/L和（3.91±0.02）mmol/L，而33无活性，提示7'位酯化有助于提高酚酰胺化合物的活性。萜类化合物只有36表现出抗补体活性，CH50为（0.34±0.08）mmol/L，3个苯丙素（7、9、24）表现出抗补体活性，CH50值为（0.75±0.05）～（4.11±0.05）mmol/L。上述结果提示酚酸及其衍生物和黄酮类成分可能为水柏枝发挥清热解毒药效的主要活性物质。
6 讨论
本研究从小花水柏枝的95% 乙醇提取物中分离并鉴定了41 个化合物，包括16 个酚酸及其衍生物、4 个黄酮类成分、4 个酚酰胺类成分、6 个萜类成分、5 个苯丙素类成分、3 个木脂素类成分和3 个其他类成分，其中化合物1 为新化合物，丰富了水柏枝属的化学成分。体外活性测定结果表明，小花水柏 枝中包含多类抗补体活性成分，其中酚酸及其衍生物和黄酮类为主要活性成分，为小花水柏枝的资源开发利用及藏药水柏枝的质量控制奠定了基础。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
参考文献（略）
来 源：张梦垚，邹吉斌，德 吉，陈道峰，卢 燕．小花水柏枝的抗补体活性成分 [J]. 中草药, 2025, 56(1): 26-38.返回搜狐，查看更多